2 服从与合成

2.1 菌株的家养菌内菌分形态特色

从云南省2个地域采摘的3个种的家养牛肝菌籽实体，共分说出可哺育的牛肝内生真菌23株，经由菌落形态开始分说少数为木霉属，生真说判从中筛选出具备菌落形态、断及颜色、其生气息等差距大的物学4株菌种，接种于CPDA哺育基上，特色在25℃下哺育5d，家养菌内菌分平板妨碍的牛肝菌落形态、光学显微镜审核的生真说判菌丝、胞子形态，断及运用MoticImagesPlus2.0软件妨碍显微形态（10×100）拍摄，其生如图1所示，物学特色形貌见表1。特色

2.2 4种内生真菌菌株ITS序列PCR扩增服从

进一步妨碍份子生物学判断，家养菌内菌分以引物ITS1以及ITS4对于内生真菌的DNA模板妨碍PCR扩增，取患上4条长度均在410～610bp之间的特异性片断，4株内生真菌的ITS扩增产物电泳服从，如图2所示。
 

2.3 4种内生真菌菌株的零星发育树构建及合成

运用ITS通用引物对于4株内生真菌妨碍序列扩增患上到4条基因序列，序列长度分说是LCTG-12为580bp；LCCK-6为410bp；BSHC18为610bp；BBFO-10为600bp。将以上4条序列分说在NCBI库中妨碍在线BLAST比对于，每一种菌下载4～5条同源性高于95%的序列，以测序患上到的基因序列为根基，同公共数据库下载的相似序列并吞，接管MEGA-X软件，凭证neighbor-joiningmethod，经由自举法1000次妨碍魔难构建零星发育树，以此对于菌株妨碍种水平的分类分说。4株菌在NCBI中BLAST比对于服从展现：在100条序列比对于服从中，LCTG-12与76株木霉属序列的序列同源性为99%以上，剖析该菌为木霉属；LCCK-6与55株念珠菌属的序列同源性为90%以上剖析该菌为念珠菌属；BSHC-18与50株菌寄生属的序列同源性为90%以上剖析该菌为菌寄生属；BBFO-10与94株的序列同源性为99%以上。

零星发育树树枝的长短展现各菌株之间的遗传距离，统一支剖析亲缘关连很近，以零星发育措施可能对于关连较为亲密的菌株序列妨碍较好的分说。散漫形态学判断及BLAST比力及零星发育树服从：LCTG-12与NCBI数据库中的Trichodermagamsii聚类在统一支上，自检反对于率100%，判断该菌为盖姆斯木霉；LCCK-6与Candidakruisii聚类在统一支上，自检反对于率为100%，判断该菌为克鲁伊假丝酵母；BSHC-18与Hypomyceschrysospermus聚类在统一支上，自检反对于率为100%，判断该菌为黄瘤孢菌；BBFO-10与Fusariumoxysprum聚类于统一株上，自检反对于率达100%，判断该菌为尖孢镰刀菌。

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