1.2.7.2 超氧阴离子逍遥基翦灭能耐的照应钻研测定

取差距浓度的LCP溶液液各0.04mL，按试剂盒退出反映试剂一0.26mL、面法试剂二0.32mL、优化氧化试剂三0.04mL、川芎试剂四0.06mL，卵白混匀，工艺即为测定组。及抗取等体积蒸馏水，活性同法制备比力组。照应钻研依上述措施，面法不加试剂三，优化氧化加蒸馏水补足体积，川芎混匀，卵白即为空缺组。工艺于37℃反映10min，及抗转移至玻璃比色皿中，蒸馏水调零，570nm读取各组吸光度值A，平行测定3次，以V_C为阴性比力组，如下公式（4）合计翦灭率。

式中：A₁：比力组吸光度值，A₂：测定组吸光度值，A₃：空缺组吸光度值。

1.2.7.3 DPPH逍遥基翦灭能耐的测定

分说罗致1.47mg/mL的LCP溶液0.二、0.四、0.六、0.八、1mL，加80%甲醇补足至1mL，备用。取上述差距浓度的LCP溶液0.4mL，按试剂盒退出0.6mL使命液制，混匀，即患上测定组。取0.4mL差距浓度的LCP溶液与0.6mL80%甲醇溶液为比力组。取0.4mL80%甲醇溶液与0.6mL使命液，短缺混匀，即无暇缺组。室温避光静置30min使之短缺反映，无水乙醇调零，于517nm读取吸光度值A，每一个浓度的样品一再测定3次，取均值，以VC为阴性比力组，按公式（5）合计翦灭率。

式中：A₁：测定组吸光度值，A₂：比力组吸光度值，A₃：空缺组吸光度值。

1.3 数据处置

试验功服从平均值±尺度差展现，接管Designexpert8.0.6妨碍照应面试验数据优化，用SPSS26.0软件妨碍方差合成，以P＜0.05展现有统计学意思。

2 服从与合成

2.1 单因素试验

试验服从见图1（a），LCP患上争先随pH的增大而增大。预料在确定规模内，增大pH，因组成羧基离子以及去质子胺，卵白质份子中含有更高的负电荷倾轧力，使卵白质以及水份子之间的相互熏染削减，而削减LCP的消融度；亦可能是因偏离LCP的等电点，而削减LCP的消融度，最终使LCP患上率增大。pH6时LCP的患上率为（2.23%±0.05%），而后LCP患上率随pH增大而减小。预料较高pH水平下提取样品时，因削减淀粉及其余杂质物资的溶出，而稀释LCP的浓度。且在碱性条件下，酚类化合物易从药材中释放并与卵白质共价散漫而后快捷氧化，导致提取物的颜色呈褐色。经方差合成，P=0.002＜0.01，表明pH对于LCP患上率的影响有极清晰性。综合思考，选取提取液pH5～7妨碍照应面法优化试验。

从图1（b）可发现，卵白质患上率因料液比的差距而差距清晰。料液比在1:5～1:15（g/mL）规模内，卵白质患上率逐渐削减，这是由于随着料液比的增大，溶液中份子散漫以及碰撞速率减速，增长卵白质份子的消融。当料液比在1:15～1:25（g/mL）规模内，患上率逐渐着落，预料是由于料液比增大而致卵白质份子散漫性加大，不易酸沉取患上卵白质，同时一些可溶性杂质消融拦阻卵白质溶出，且有利于取患上纯度较好的卵白质。经方差合成，P=0.032＜0.05，表明料液比对于LCP患上率的影响具备清晰性。综合思考，选取料液比1:10～1:20（g/mL）妨碍照应面法优化试验。

从图1（b）可发现，卵白质患上率因料液比的差距而差距清晰。料液比在1:5～1:15（g/mL）规模内，卵白质患上率逐渐削减，这是由于随着料液比的增大，溶液中份子散漫以及碰撞速率减速，增长卵白质份子的消融。当料液比在1:15～1:25（g/mL）规模内，患上率逐渐着落，预料是由于料液比增大而致卵白质份子散漫性加大，不易酸沉取患上卵白质，同时一些可溶性杂质消融拦阻卵白质溶出，且有利于取患上纯度较好的卵白质。经方差合成，P=0.032＜0.05，表明料液比对于LCP患上率的影响具备清晰性。综合思考，选取料液比1:10～1:20（g/mL）妨碍照应面法优化试验。

在特定条件下，卵白质浸出需要确守光阴抵达失调形态；光阴较短，份子散漫功能确定，卵白质溶出量有限；缩短浸提光阴卵白质患上率呈着落趋向，可能是由于卵白质持久在碱性情景中会爆发细小水解以及变性，而且光阴缩短也会削减非卵白物资浸出，影响卵白质进一步积淀以及卵白废品的纯度，且与同类豆类如豌豆、大豆以及蚕豆比照，川芎富含差距的多糖，多糖与卵白质的相互熏染可能导致川芎中提取卵白的价钱飞腾。经方差合成，P=0.023＜0.05，表明提取光阴对于LCP患上率的影响具备清晰性。综合思考，选取提取光阴1～2h妨碍照应面法优化试验。

2.2 照应面合成LCP提取工艺试验服从

2.2.1 照应面法优化试验妄想及服从

每一组样品平行测定3次，取平均值，并妨碍数据散点图以及统计合成。DesignExpert8.0.6软件妨碍照应面妄想及服从合成。服从如表3所示，患上拟合方程为

y=2.28+0.18A+0.21B+0.19C−0.055AB+0.078AC+0.13BC−0.47A²−0.34B²−0.54C²。

2.2.2 方差合乐成果

如表4所示，模子F=40.23，Pr＞F＜0.01，剖析此回归模子是极清晰的。方程失拟项F=0.89，Pr＞F＞0.05，失拟项相对于纯倾向影响不清晰，剖析回归模子与实测值拟合度较好，适用性高，可能运用该回归方程替换试验着实点合成试验服从。各因素的影响巨细为：提取光阴＜提取溶剂pH＜料液比。经由F魔难来判断，多少率P（F＞Fα）的值越小，则响应变量的清晰水平越高，对于试验目的的影响越大，P_A、P_B、P_C均小于0.01，剖析提取光阴、料液比、提取溶剂pH对于LCP患上率的影响极清晰。R²=0.9810，R²_Adj=0.9566，展现所建树的模子可能很好地反映自力变量以及照应变量之间的关连。

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